熒光光度法測(cè)定酶的催化活性

熒光光度法測(cè)定酶的催化活性,此方法很少用于粗酶或者是純酶制備中催化活性的檢測(cè)。由于它具有很高的靈敏度，可以用于器官或者組織區(qū)域的微量酶的測(cè)定。 總體上，這種方法的靈敏度是吸光光度法的1000 多倍。主要用于對(duì)經(jīng)光源激發(fā)后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)或經(jīng)化學(xué)處理后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)成份分析，可應(yīng)用于生物化學(xué)、生物醫(yī)學(xué)、環(huán)境化工等部門(mén)。

熒光光度法和分光光度法有什么不同？

實(shí)際上分光光度計(jì)的概念較多,分光光度計(jì)還有紫外分光光度計(jì),紅外分光光度計(jì)等叫法.其主要是根據(jù)能量躍遷原理來(lái)區(qū)分.
例如紫外分光光度計(jì)是測(cè)量物質(zhì)經(jīng)過(guò)紫外激發(fā)后物質(zhì)可以吸收紫外光多少,測(cè)量的值是通過(guò)物質(zhì)的光,檢測(cè)信號(hào)與發(fā)射信號(hào)在一條直線上.
而熒光分光光度計(jì)是給與一個(gè)激發(fā)波長(zhǎng)后,到達(dá)激發(fā)態(tài),再發(fā)射光,所以檢測(cè)的是物質(zhì)發(fā)射的光,檢測(cè)信號(hào)與發(fā)射器不在一條線上.
例如蛋白質(zhì),因?yàn)槔锩嬗欣野彼?、色氨酸的發(fā)色基團(tuán),一般的聯(lián)苯結(jié)構(gòu),也就是可以形成ππ共軛體系的物質(zhì)都可發(fā)射熒光.如果物質(zhì)自身不帶有熒光,則可以加入熒光探針.

熒光分光光度計(jì)是用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強(qiáng)度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數(shù)，從各個(gè)角度反映了分子的成鍵和結(jié)構(gòu)情況。通過(guò)對(duì)這些參數(shù)的測(cè)定， 不但可以做一般的定量分析, 而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化， 從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系。熒光分光光度計(jì)的激發(fā)波長(zhǎng)掃描范圍一般是190~650nm，發(fā)射波長(zhǎng)掃描范圍是200~800nm?？捎糜谝后w、固體樣品（如凝膠條）的光譜掃描。

熒光分光光度計(jì)的種類：可分為單光束式熒光分光光度計(jì)和雙光束式熒光分光光度計(jì)兩大系列。

熒光分光光度計(jì)的發(fā)展經(jīng)歷了手控式熒光分光光度計(jì)，自動(dòng)記錄式熒光分光光度計(jì)，計(jì)算機(jī)控制式熒光分光光度計(jì)三個(gè)階段；其他的還有低溫激光Sh p ol’skill熒光分光光度計(jì)，配有壽命和相分辯測(cè)定的熒光分光光度計(jì)等。

熒光分光光度計(jì)的構(gòu)成：

1. 光源：
為高壓汞蒸氣燈或氙弧燈，后者能發(fā)射出強(qiáng)度較大的連續(xù)光譜，且在300nm～400nm 范圍內(nèi)強(qiáng)度幾乎相等，故較常用。
2．激發(fā)單色器：
置于光源和樣品室之間的為激發(fā)單色器或第一單色器，篩選出特定的激發(fā)光譜。
3．發(fā)射單色器：
置于樣品室和檢測(cè)器之間的為發(fā)射單色器或第二單色器，常采用光柵為單色器。篩選出特定的發(fā)射光譜。
4． 樣品室：
通常由石英池(液體樣品用)或固體樣品架(粉末或片狀樣品)組成。測(cè)量液體時(shí)，光源與檢測(cè)器成直角安排；測(cè)量固體時(shí)，光源與檢測(cè)器成銳角安排。
5． 檢測(cè)器：
一般用光電管或光電倍增管作檢測(cè)器。可將光信號(hào)放大并轉(zhuǎn)為電信號(hào)。

熒光分光光度計(jì)的基本原理：

由高壓汞燈或氙燈發(fā)出的紫外光和藍(lán)紫光經(jīng)濾光片照射到樣品池中，激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)發(fā)出熒光，熒光經(jīng)過(guò)濾過(guò)和反射后，被光電倍增管所接受，然后以圖或數(shù)字的形式顯示出來(lái)。
物質(zhì)熒光的產(chǎn)生是由在通常狀況下處于基態(tài)的物質(zhì)分子吸收激發(fā)光后變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài), 這些處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩(wěn)定的,在返回基態(tài)的過(guò)程中將一部分的能量又以光的形式放出，從而產(chǎn)生熒光．
不同物質(zhì)由于分子結(jié)構(gòu)的不同,其激發(fā)態(tài)能級(jí)的分布具有各自不同的特征，這種特征反映在熒光上表現(xiàn)為各種物質(zhì)都有其特征熒光激發(fā)和發(fā)射光譜；，因此可以用熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的不同來(lái)定性地進(jìn)行物質(zhì)的鑒定。
在溶液中，當(dāng)熒光物質(zhì)的濃度較低時(shí),其熒光強(qiáng)度與該物質(zhì)的濃度通常有良好的正比關(guān)系,即IF=KC,利用這種關(guān)系可以進(jìn)行熒光物質(zhì)的定量分析,與紫外-可見(jiàn)分光光度法類似，熒光分析通常也采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行。

熒光分光光度計(jì)的功能特點(diǎn)：

1． 熒光發(fā)射光譜
選擇某一固定波長(zhǎng)的光激發(fā)樣品，記錄樣品中產(chǎn)生的熒光發(fā)射強(qiáng)度與發(fā)射波長(zhǎng)間的函數(shù)關(guān)系，即得熒光發(fā)射光譜。
2． 熒光激發(fā)光譜
選定某一熒光發(fā)射波長(zhǎng)記錄熒光發(fā)射強(qiáng)度作為激發(fā)光波長(zhǎng)的函數(shù)，即得熒光激發(fā)光譜。
3．時(shí)間分辨技術(shù)；
可用于對(duì)混合物中光譜重疊但有壽命差異的組分進(jìn)行分辨并分別測(cè)量。
時(shí)間分辨熒光測(cè)定公式如下：
P(t) = P0 EXP (-t /τ)
式中P(t)：擬合指數(shù)函數(shù)
P0：強(qiáng)度取值
EXP：指數(shù)運(yùn)算符
t：時(shí)間取值
τ：熒光平均時(shí)間壽命

酶制劑相關(guān)產(chǎn)品如下：

因 酶制劑產(chǎn)品眾多，如：過(guò)氧化氫酶 粉末、α-葡萄糖苷酶，詳情進(jìn)入酶制劑產(chǎn)品頁(yè)