過(guò)氧化氫酶的活性測(cè)定

過(guò)氧化氫酶的活性測(cè)定分為化學(xué)測(cè)定法和光度法兩種：

一、化學(xué)測(cè)定法：高錳酸鉀滴定法，碘量法。

二、光度法：紫外分光光度法，熒光分析法，化學(xué)發(fā)光法。 電化學(xué)法：極譜氧電極法，電流測(cè)定法，電泳一染色法。 放射化學(xué)測(cè)定法。 簡(jiǎn)易氣量測(cè)定法。

具體測(cè)定如下：

高錳酸鉀滴定法： 過(guò)氧化氫酶（CAT）屬于血紅蛋白酶，含有鐵，它能催化過(guò)氧 化氫分解為水和分子氧，在此過(guò)程中起傳遞電子的作用，過(guò)氧 化氫則既是氧化劑又是還原劑。 據(jù)此，可根據(jù)H2O2的消耗量或O2的生成量測(cè)定該酶活力大小。 在反應(yīng)系統(tǒng)中加入一定量（反應(yīng)過(guò)量）的H2O2溶液，經(jīng)酶促反 應(yīng)后，用標(biāo)準(zhǔn)高錳酸鉀溶液（在酸性條件下）滴定多余的H2O2 。  即可求出消耗的H2O2的量。  酶活性用每克鮮重樣品1min內(nèi)分解H2O2的毫克數(shù) 表示： 酶活(mgH2O2/gFW·min)= 式中 A—對(duì)照KMnO4滴定毫升數(shù)； B—酶反應(yīng)后KMnO4滴定毫升數(shù)； VT—酶液總量（ml）； V1—反應(yīng)所用酶液量（ml）; W—樣品鮮重（g）； 1.7—1ml 0.1mol/L的KMnO4相當(dāng)于 1.7mg H2O2。 

紫外分光光度法: H2O2在240nm波長(zhǎng)下有強(qiáng)烈吸收，過(guò)氧化氫酶能分解過(guò)氧 化氫，使反應(yīng)溶液吸光度(A240)隨反應(yīng)時(shí)間而降低。根據(jù) 測(cè)量吸光率的變化速度即可測(cè)出過(guò)氧化氫酶的活性。 以1min內(nèi)A240減少0.1的酶量為1個(gè)酶活單位（u）。 過(guò)氧化氫酶活性(u/gFW/min)= 式中 A240 = AS0－ AS0—加入煮死酶液的對(duì)照管吸光值； AS1, AS2—樣品管吸光值； Vt—粗酶提取液總體積（ml）； V1—測(cè)定用粗酶液體積（ml）； FW—樣品鮮重（g）； 0.1—A240每下降0.1為1個(gè)酶活單位（u）； t—加過(guò)氧化氫到最后一次讀數(shù)時(shí)間（min）。 

方法比較： 研究認(rèn)為，化學(xué)滴定法重復(fù)性差、緊密度 低、操作繁瑣、檢測(cè)線低，不適于大批量 的樣品測(cè)定。其優(yōu)點(diǎn)是不需要任何特殊的 儀器，適用性比較廣泛。 紫外分光光度法具有重現(xiàn)性好，操作簡(jiǎn)單、 快速、檢測(cè)線相對(duì)較低得到優(yōu)點(diǎn)。但是對(duì) 于測(cè)定底物或產(chǎn)物改變量方面不太準(zhǔn)確。

過(guò)氧化氫酶的活性測(cè)定總結(jié)：

綜上所述，過(guò)氧化氫酶活性測(cè)定的方法大都基于 過(guò)氧化氫酶催化過(guò)氧化氫的分解反應(yīng)：根據(jù)反應(yīng) 生成的氧氣的量、反應(yīng)剩余的過(guò)氧化氫的量或根 據(jù)反應(yīng)時(shí)的電子的轉(zhuǎn)移及電流的變化等。同時(shí)， 影響測(cè)定結(jié)果的因素很多，如過(guò)氧化氫的濃度、 酸度、溫度及重金屬的含量等；并且各種方法的 準(zhǔn)確性和靈敏度也有一定差異。因此，在測(cè)定CAT 活性時(shí)，應(yīng)該根據(jù)具體組織種類及測(cè)量要求選擇 適合的測(cè)定的方法。

因酶制劑產(chǎn)品眾多，如：過(guò)氧化氫酶 粉末、α-葡萄糖苷酶、膽固醇酯酶 、尿酸酶、輔酶A、抑肽酶、胰凝乳蛋白酶、乙酰膽堿酯酶、彈性蛋白酶、膽固醇氧化酶 、超氧化物歧化酶、腸激酶、膽紅素氧化酶、嘌呤核苷磷酸化酶、葡萄糖氧化酶、凝血酶、心肌黃酶、磷酸葡萄糖變位酶、己糖激酶、辣根過(guò)氧化物酶、葡萄糖 -6-磷酸脫氫酶、腺苷脫氨酶、核糖核酸酶、黃嘌呤氧化酶、溶菌酶等，詳情進(jìn)入酶制劑產(chǎn)品頁(yè)